细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。目前，将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类：1、脂质体（或是脂质体替代物）转染；2、电转；3、病毒感染。转染技术又可分为瞬时转染和稳定转染

基因的功能研究可分为loss-of-function和gain-of-function，即通过过表达该基因和抑制内源基因的表达的手段来研究某个基因的生物学功能。常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。

 

 

通过脂质体介导转染法基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）

 

1、接收质粒、细胞

2、细胞培养

3、转染

4、拍照

5、效率鉴定

 

1、构建好的外源基因载体，或由本公司进行载体构建（需提供目的基因名称、种属、序列或Gene Accession Number）。

2、待转染的细胞系（1×106个细胞，可传代，倍增时间小于48小时）以及细胞培养条件的说明。

3、若需要检测靶基因的表达，需提供相应抗体或由公司代购。

1、构建好的瞬时转染细胞。

2、实验报告：详细实验步骤及相关的外源基因表达分析。

 

 

稳定转染，就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。

 

1、接收质粒、细胞

2、细胞培养

3、转染

4、抗生素筛选

5、得到单克隆细胞株

6、扩增

7、检测

 

1、构建好的外源基因载体，或选择由公司构建（价格参考载体构建）。

2、待转染的细胞系（1×106个细胞，可传代，倍增时间小于48小时）以及细胞培养条件的说明。

3、提供相应抗体

 

1、构建好的稳定表达细胞系。

2、实验报告：详细步骤、相关的外源基因表达分析等。

 

项目	备注	周期
瞬时转染+鉴定	鉴定方法为western blot	10个工作日
稳定转染+鉴定	鉴定方法为western blot	45个工作日(贴壁细胞)